CytekAssaySetting… ¿eso se come?

A medida que la citometría de flujo se ha ido desarrollando, uno de los principales retos a los que se ha tenido que enfrentar ha sido a la generación de datos robustos y de calidad, pero tratando, al mismo tiempo, de minimizar la variabilidad entre equipos, centros y usuarios. Por ello, los equipos de citometría espectral, o de espectro completo (Full Spectrum), de Cytek llevan integrada la característica CytekAssaySetting o CAS, que proporciona un método rápido y automatizado de estandarización de su configuración.

Mediante el control de calidad diario (Daily QC), las ganancias de todos los detectores se ajustan de manera que la intensidad media de fluorescencia (MFI) de las SpectroFlo® QC beads se corresponda con sus valores óptimos. De este modo, la configuración CytekAssaySetting del equipo se actualiza a partir de estos ajustes, proporcionando un buen punto de partida para obtener datos reproducibles y de alta resolución.

Gracias a esto, la tecnología de Cytek permite reducir la variabilidad entre equipos, así como una mayor reproducibilidad entre los datos obtenidos en diferentes centros. Además de los propios equipos, el software de Cytek, los accesorios y el soporte proporcionado por la compañía también pueden ayudar a la estandarización y la armonización de los datos obtenidos.

¿Cómo estandarizar un experimento entre laboratorios?

Una vez que el mismo equipo, con la misma configuración, está instalado en cada uno de los laboratorios implicados, puede comenzar el proceso de diseño y configuración estandarizado.

El experimento ha de ser diseñado, optimizado y validado en un único equipo con una configuración (CytekAssaySetting) optimizada previamente. Después de generar el experimento, la plantilla o template puede ser guardada y compartida con el resto de los laboratorios. Además, se puede importar en sus equipos y el experimento estará disponible en los demás centros participantes.

La teoría está muy bien, pero yo quiero un caso real…

En el congreso CYTO 2023 celebrado el pasado mes de mayo en Montreal, Cytek presentó un póster titulado Integrated Standarization of Instrument Setup Using Full Spectrum Flow Cytometry and CytekAssaySettings cuyo contenido se resume a continuación.

Teniendo en cuenta que la reproducibilidad de los resultados en la citometría de flujo es fundamental, y que puede verse comprometida por diferentes factores (equipos, calidad de las muestras y los reactivos, protocolos de marcaje, adquisición, procedimientos de análisis y usuarios), el objetivo de este estudio fue reducir la variabilidad en los datos obtenidos mediante la estandarización de las configuraciones de los equipos.

¿Cómo lo consiguieron?

Para ello, en este trabajo se utilizaron células liofilizadas y marcadas previamente (BioLegend) en base a un panel de 18 fluorocromos (ver tabla a la derecha). Esto permitió controlar la variabilidad debida a donantes, reactivos y marcaje. Las muestras fueron adquiridas en diferentes equipos Cytek Aurora de 5 láseres, utilizando CytekAssaySettings y el diseño del experimento se llevó a cabo en el software SpectroFlo. Además, se aplicó un protocolo estandarizado para minimizar posibles variaciones debidas a preparación de la muestra, parámetros de adquisición, unmixing y análisis. Se evaluaron tres grupos experimentales:

  • Grupo 1: 5 kits del mismo lote adquiridos en diferentes momentos, pero por el mismo usuario, en el mismo equipo y en un mismo día.
  • Grupo 2: 3 kits del mismo lote preparados y adquiridos por 9 usuarios diferentes de 9 centros, pero siguiendo el mismo protocolo de reconstitución y adquisición.
  • Grupo 3: un solo kit del mismo lote se analizó de forma independiente por 15 usuarios diferentes de 15 centros siguiendo un protocolo de reconstitución y adquisición no estandarizado. 

Resultados

Gracias al uso de CytekAssaySettings se observó una alta consistencia en la frecuencia y la MFI de diversas poblaciones entre los diferentes grupos y centros participantes (Figuras D y E).

Además, el coeficiente de variación (CV) fue inferior al límite del 15% en todos los casos tanto en el porcentaje de células vivas como en la MFI en diferentes subpoblaciones en los tres grupos analizados. Figuras F y H. Rango del %CV del porcentaje de células vivas y de la MFI, respectivamente, en los diferentes grupos: 1) 1,97%-7,21% y 0,75%-3.8%; 2) 3,03%-6,75% y 3,56%-12.68%; 3) 4.48%-13.93% y 6.25%-14.67%.

Como resultado, la estandarización de la configuración del equipo de Cytek utilizando CytekAssaySetting permitió alcanzar altos niveles de reproducibilidad entre los 25 centros implicados en el estudio y a diferentes tiempos, lo que facilitaría la realización de estudios multicéntricos y longitudinales, respectivamente. Asimismo, esta configuración, unido al uso de una estrategia de gating fija, también podría ser de gran ayuda para investigadores y clínicos centrados en estudios de inmunofenotipado.

Si quieres saber más...

Referencias

https://cytekbio.com/pages/multi-site-standarization-applications

Fleming, C. et al. Integrated Standarization of Instrument Setup Using Full Spectrum Flow Cytometry and CytekAssaySettings. Poster presentado en CYTO 2023, Montreal (Canadá).

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