El cultivo celular es el proceso mediante el que células, ya sean procariotas o eucariotas, pueden cultivarse en condiciones controladas. En la práctica el término “cultivo celular” se usa normalmente en referencia al cultivo de células aisladas de eucariotas pluricelulares, especialmente células animales.

Se trata de una de las técnicas más ampliamente utilizadas en todos los laboratorios, tanto de investigación como de diagnóstico e industria.

1. Asegúrese de que todos los materiales de laboratorio estén estériles.

La contaminación cruzada es el mayor enemigo del cultivo celular. Aunque sea minima, puede arruinar semanas de investigación. Los hongos crecen fácilmente debido a las condiciones cálidas y húmedas de la incubadora, por lo que es importante su cuidado y limpieza de manera regular. Además, desinfecte con etanol las botellas limpias de medios de cultivo, pipetas y otros materiales pertinentes antes de colocarlos en la campana con su medio de cultivo para evitar este tipo de contaminación.

2. Manipule e incube sus cultivos con cuidado.

La fragilidad de los cultivos celulares no puede ser menospreciada. Una agitación vigorosa, vibraciones constantes o la variación continua de temperatura pueden disminuir la curva de crecimiento de manera importante. Asegúrese de que la incubadora está nivelada, la temperatura es uniforme y los cultivos estén lejos de instrumentos motorizados. Además, se debe evitar el manejo a la vez de múltiples líneas de células, ya que podría comprometer el genotipo y el fenotipo de las células. También debe hacerse regularmente un perfil STR para garantizar o confirmar la identidad de las líneas celulares.

3. Descongele correctamente las células criopreservadas antes de su uso.

 La descongelación puede parecer un paso sencillo, pero es esencial que se realice apropiadamente para evitar daños a las células. La exposición prolongada al calor y centrifugación producen que las células no puedan ser sembradas en placas. Por lo tanto, el criovial debe ser colocado en un baño de agua a 37 ° C durante aproximadamente dos minutos y después diluir en medio aclimatado para impedir el daño inmediato causada por el DMSO.

4. Utilice células en crecimiento activo que se encuentren en su fase logarítmica de crecimiento

Las células presentan tres fases en el proceso de cultivo. La fase de latencia, la fase logarítmica y la fase de meseta que representan bajo, alto y nulo crecimiento celular respectivamente. Las células más viables son saludables y se dividen rápidamente. Esto se produce principalmente cuando existe una confluencia celular entre 70-80% aproximadamente, en mitad de la fase logarítmica.

5. No permita que las células alcancen la confluencia completa antes del pase.

La confluencia se refiere a la proporción de células adhheridas a la superficie del matraz. Una confluencia completa significa que el 100% de la superficie está cubierta de células adherentes. Es importante evitar este estado, ya que representa una incapacidad para que las células continúen creciendo y es fundamental utilizar células en crecimiento activo.

6. Seleccione la mejor estrategia de desarrollo de los medios de cultivo.

 Los medios de cultivo son un factor directamente relacionado con la calidad, el rendimiento y el coste. Es de vital importancia que los medios se adapten a cada cultivo para optimizar la eficacia y los resultados del experimento. Hay varias opciones para elegir la forma de desarrollar sus medios de cultivo. Se pueden comprar a empresas comerciales, producirlos en el laboratorio, trabajar en colaboración con otras compañías para desarrollar medios más específicos, o una combinación de cualquiera de estas alternativas. Algunos factores a considerar al elegir una estrategia determinada incluyen el plazo de entrega, el coste de los materiales y la etapa de desarrollo del producto.

7. Evalue la calidad del agua al trabajar con medios en polvo.

Los medios líquidos distribuidos comercialmente tienden a producir resultados de mayor calidad que los medios en polvo. Esto se puede atribuir a la calidad del agua utilizada por compañía que fabrica los medios de cultivo líquidos. Debido al rápido crecimiento bacteriano en el agua, es importante controlar las endotoxinas y otros contaminantes. Las empresas tienen recursos suficientes para vigilar y controlar el crecimiento de bacterias, tales como filtros bacterianos y molinos de bolas. Por tanto, es más fiable utilizar medios líquidos producidos por compañías comerciales.

8. Manipule las características del metabolismo celular para optimizar los medios de cultivo.

El análisis de los medios de cultivo que han sido utilizados puede contribuir a la identificación de la tasa de metabolismo y proporcionan información sobre algunos components vitals, como por ejemplo aminoácidos y vitaminas. Los perfiles metabólicos dinámicos obtenidos a partir de la fase de crecimiento celular y la fase de producción estacionaria se pueden utilizar para equilibrar estequiométricamente los medios basales y de alimentación, dirigir el objetivo de los medios de cultivo para una reacción específica y alterar la relación de la formación de biomasa para la producción de proteínas.

9. Evite el sobre-tratamiento de las células con tripsina.

La tripsina es una enzima proteolítica que permite despegar células adherentes mediante la digestión de las proteínas responsables de la unión de las células a la pared de los frascos de cultivo. Si las células permanecen expuestas a la tripsina durante demasiado tiempo, se comenzarán a degradar proteínas de la superficie celular, lo que afectará al correcto funcionamiento de la célula.

10. No utilice antibióticos en los medios de cultivo de manera sistemática.

Cuando un cultivo celular está expuesto a los antibióticos frecuentemente, las cepas con una resistencia innata a los mismos comienzan a desarrollarse. Este fenómeno puede enmascarar la contaminación subyacente, lo que podría resultar extremadamente perjudicial para el experimento.

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